همسانه سازی ژن tfgd2شنبلیله، بیان پروکاریوتی آن و مطالع? اثر ضد قارچی پروتئین tfgd2 بیان شده

دفنسین ها می توانند بعنوان عوامل ضد قارچی در کنترل قارچ های بیماریزای گیاهی مورد استفاده قرار گیرند. بدین منظور cdna ژن دفنسین گیاه شنبلیله بعد از تایید، در ناقل همسانه سازی pjet1.2 زیرهمسانه سازی شد. پس از تأیید همسانه سازی این ژن، از سازه نوترکیبpjetsh1 خارج و در ناقل بیانی پروکاریوتی pet26 b(+) همسانه سازی و تأیید شد. پس از انتقال سازه نوترکیب جدید به نام petsh1 به میزبان بیانی e. coli bl21(de3) مراحل بهینه سازی بیان به وسیله تست تاگوچی انجام و پروتئین بیان شده به وسیله روش وسترن بلات تأیید شد. در نهایت با استفاده از روش کروماتوگرافی میل ترکیبی به وسیله ستون ni-nta، پروتئین نوترکیب tfgd2 تخلیص شده و غلظت آن به روش برادفورد تعیین شد. در ادامه به منظور بررسی فعالیت پروتئین tfgd2 در برابر قارچ های بیماری زای sclerotinia sclerotiorum، fusarium oxysporum، verticillium dahlia و alternaria solani ، از آزمون های زیست سنجی radial diffusion assay، disk diffusion assay و رنگ آمیزی sytox green و تست مورفولوژی(clean slide culture ) استفاده شد. نتایج این آزمون ها حاکی از فعالیت بازدارندگی پروتئین دفنسین گیاه شنبلیله در برابر قارچ های مورد بررسی می باشد.